许志 谢梦洲 许必祥 刘雪辉 贺静 王筱宇
〔摘要〕 目的 观察鹜芪口服液联合化疗对Lewis肺癌小鼠化疗效果的影响。方法 将腋下接种Lewis肺癌细胞小鼠随机分为6组，分别为模型对照组、化疗组、化疗+贞芪扶正颗粒组（贞芪扶正组）、化疗+鹜芪口服液低剂量组（鹜芪低剂量组）、化疗+鹜芪口服液中剂量组（鹜芪中剂量组）、化疗+鹜芪口服液高剂量组（鹜芪高剂量组），同时设立正常对照组，各组按照给药方法进行连续给药21 d。给药后每隔3 天，对Lewis肺癌小鼠的肿瘤的长径和短径进行测定、给藥21 d后对血液中炎性细胞WBC、Neu、Lym、Mon、Eos、Bas的数目进行测定，并对胸腺、脾脏、胃进行组织病理学检查。结果 与化疗组比较，鹜芪低、中剂量组小鼠给药第15～21天肿瘤体积减少;鹜芪高剂量组小鼠给药第21天肿瘤体积明显减少（P<0.05）。与化疗组比较，鹜芪低、中、高剂量组小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos数目明显减少（P<0.05或P<0.01）。鹜芪口服液联合化疗能明显改善小鼠脾脏红髓造血情况，改善胸腺萎缩和局灶性纤维化。结论 鹜芪口服液联合化疗用药对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有明显的增效减毒作用。
〔关键词〕 鹜芪口服液;化疗;肿瘤体积;增效减毒;炎性细胞
〔中图分类号〕R285.5 〔文献标志码〕A 〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.05.008
The Study About Effect-enhancing and Toxicity-reducing Effects of Wuqi Oral Liquid
Combined with Chemotherapy in Mice with Lewis Lung Cancer
XU Zhi1， XIE Mengzhou2*， XU Bixiang1， LIU Xuehui1， HE Jing1， WANG Xiaoyu1
（1. Hunan Tianjin Pharmaceutical Co.， Ltd. Changsha， Hunan 410205， China; 2. Hunan University of
Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China）
〔Abstract〕 Objective To observe the effect of Wuqi Oral Liquid combined with chemotherapy on the chemotherapy effect of Lewis lung cancer mice. Methods Mice inoculated with Lewis lung cancer cells under the armpits were randomly divided into 6 groups：
model control group， chemotherapy group， chemotherapy+Zhenqi Fuzheng granule group （Zhenqi Fuzheng group）， chemotherapy+Wuqi Oral Liquid low-dose group （Wuqi low-dose group）， chemotherapy+Wuqi Oral Liquid medium-dose group （Wuqi medium-dose group）， chemotherapy+Wuqi Oral Liquid high-dose group （Wuqi high-dose group）， and a normal control group was set up at the same time， each group was dealt with the administration method. The administration of drug was continued for 21 days. The long and short diameters of the tumors in Lewis lung cancer mice were measured every 3 days after the administration. After 21 days of administration， the blood inflammatory cells WBC， Neu， Lym， Mon， Eos and Bas was measured， and histopathological examination was performed on the thymus， spleen， and stomach. Results Compared with the chemotherapy group， the volume of tumors in mice of Wuqi low and medium doses group decreased from 15 to 21 days after administration; the volume of tumors in mice of Wuqi high-dose group was significantly reduced on the 21st day （P<0.05）. Compared with the chemotherapy group， the number of WBC， Neu， Mon， Eos inflammatory cells in the blood of mice of Wuqi low， medium and high doses group significantly reduced （P<0.05 or P<0.01）. Wuqi Oral Liquid combined with chemotherapy can significantly improve the hematopoiesis of the red marrow of the mouse spleen， and improve thymic atrophy and focal fibrosis. Conclusion Wuqi Oral Liquid combined with chemotherapy has a significant effect of increasing efficacy and reducing toxicity in mice with Lewis lung cancer.
〔Keywords〕 Wuqi Oral Liquid; chemotherapy; tumor volume; effect-enhancing and toxicity-reducing; inflammatory cells
肿瘤化疗是目前癌症治疗的主要手段之一，化疗药物进入机体后广泛分布于肝脏、肾脏、血液等组织器官，并主要由肝脏、肾脏代谢和排出[1]。因此，化療药物在杀灭肿瘤细胞的同时，也不可避免地损伤了机体正常的细胞，表现出一系列化疗的不良反应，如免疫功能下降、骨髓抑制、肝脏毒性、肾脏毒性、消化道障碍等[2-4]。中医学认为化疗属于以毒攻毒的治法[5]，最易伤人正气，而表现出机体虚弱等症状。在全球癌症（GLOBOCAN）2018数据库中，每年全球估计有209万新病例，176万人死于肺癌[6]。鹜芪口服液为湖南天劲制药有限责任公司独家品种，以鸭为君药入药，功效为养阴益气、补虚扶正，能够提升机体正气。本次采用Lewis肺癌细胞接种小鼠，进行肿瘤小鼠模型制备，研究鹜芪口服液联合化疗药物对增加化疗耐受性的影响，贞芪扶正颗粒是化疗期间常用的中成药[7]，对化疗所致的毒性有一定的减毒作用，此次研究以此药作为阳性对照药。
1 材料
1.1 实验动物
雄性C57BL/6J小鼠140只，体质量12～15 g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物质量合格证号：43004700057020、43004700060135，实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2016-0002;在湖南省药物安全评价研究中心屏障环境饲养，实验动物使用许可证号：SYXK（湘）2015-0016。
1.2 主要药品
鹜芪口服液（10 mL/支，批号：1812012，湖南天劲制药有限责任公司）;贞芪扶正颗粒（15 g/袋，批号：20180403，湖南时代阳光药业股份有限公司）;顺铂注射液（2 mL∶10 mL，批号：181204，江苏豪森药业集团有限公司）;依托泊苷注射液（5 mL∶0.1 g，批号：CB1K7005，齐鲁制药（海南）有限公司）;0.9%氯化钠注射液（批号：18073101C，湖南康源制药有限公司）
1.3 主要仪器
BC-5000Vet型兽用五分类血液细胞分析仪（迈瑞公司）;游标卡尺（永康正丰五金有限公司）;ME2002E型电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]。
2 方法
2.1 分组及剂量设计
接种Lewis肺癌细胞小鼠，根据瘤体体积随机分为6组，每组20只，分别为：模型对照组、化疗组（依托泊苷3.0 mg/kg+顺铂2.0 mg/kg）、化疗+贞芪扶正颗粒组（贞芪扶正组，3.9 g/kg）、化疗+鹜芪口服液低剂量组（鹜芪低剂量组）（2.6 mL/kg）、化疗+鹜芪口服液中剂量组（鹜芪中剂量组，5.2 mL/kg）、化疗+鹜芪口服液高剂量组（鹜芪高剂量组，10.4 mL/kg）。另外取20只未接种Lewis肺癌细胞小鼠作为正常对照组。鹜芪口服液成人临床剂量为10 mL，2次/d，20 mL/d，按体表面积法换算动物等效剂量为2.6 mL/kg。鹜芪口服液低、中、高剂量分别为2.6、5.2、10.4 mL/kg。贞芪扶正颗粒成人拟推荐剂量为15 g，2次/d，30 g/d，按体表面积法换算动物等效剂量为3.9 g/kg。顺铂注射液临床使用15 mg/d，换算小鼠等效剂量为2 mg/kg。经查阅文献，依托泊苷注射液剂量为3.0 mg/kg[8]。
2.2 给药方法
除正常对照组与模型对照组外，化疗组、贞芪扶正组、鹜芪低剂量组、鹜芪中剂量组、鹜芪高剂量组动物均腹腔注射给予化疗药物，1次/d，连续给药7 d，同时贞芪扶正组、鹜芪低剂量组、鹜芪中剂量组、鹜芪高剂量组分别给予相应浓度药液，给予体积为20 mL/kg，1次/d，连续给药21 d，正常对照组、模型对照组、化疗组小鼠分别灌胃给予同体积蒸馏水。
2.3 测定方法
2.3.1 公式法测定瘤体体积 给药后每隔3 d用游标卡尺检测肿瘤的长径和短径，根据公式计算肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。计算公式为：肿瘤体积=ab2/2（a为长径，b为短径）[9]。
2.3.2 血液细胞分析仪测定血液中炎性细胞数目 造模后及末次给药后采用BC-5000Vet型兽用五分类血液细胞分析仪进行血常规功能检测，检测指标为：白细胞（white blood cell， WBC）、中性粒细胞（neutrophil， Neu）、淋巴细胞（lymphocyte， Lym）、单核细胞（monocytes， Mon）、嗜酸性粒细胞（eosinophils， Eos）、嗜碱性粒细胞（basophils， Bas）。
2.3.3 苏木素-伊红（HE）染色法观测组织病理学变化 末次给药后，对正常对照组、模型对照组、化疗组、贞芪扶正组、鹜芪低剂量组、鹜芪中剂量组、鹜芪高剂量组进行固定、包埋、切片、HE染色、显微镜观察，进行组织病理学检查，受检脏器为：胸腺、脾脏、胃。
2.4 统计学处理
采用SPSS 16.0 进行统计分析，计量资料采用“x±s”表示，用Levens test方法检验正态性和方差齐性，如果符合正态性和方差齐性（P>0.05），用单因素方差分析（ANOVA）和LSD检验进行统计分析;如果符合正态性和方差齐性，则用Kruskal-Wallis检验，如果Kruskal-Wallis检验有统计学意义（P≤0.05），则用Dunnetts Test（非参数方法）进行比较分析，统计学意义的水平设定为P<0.05。
3 结果
3.1 鹜芪口服液对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤体积的影响
模型对照组小鼠肿瘤体积在第0～18天持续增长，在第21天有所减少;与化疗组比较，鹜芪低剂量组、鹜芪中剂量组、鹜芪高剂量组，小鼠在给药第15～21天肿瘤体积减小;与化疗组比较，鹜芪高剂量组小鼠在给药第21天肿瘤体积明显减少（P<0.05）。见图1。
3.2 鹜芪口服液对Lewis肺癌荷瘤小鼠炎性细胞数目影响
给药21 d后，与正常对照组比较，模型对照组小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos、Bas明显升高（P<0.01）。与模型对照组比较，化疗组小鼠血液中Bas明显减少（P<0.05）;贞芪扶正组小鼠血液中WBC、Neu、Bas明显减少（P<0.05）;鹜芪低、中、高剂量组小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos、Bas明显减少（P<0.05或P<0.01）。与化疗组比较，贞芪扶正组小鼠血液中WBC、Neu明显减少（P<0.05）;鹜芪低、中、高剂量组小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos明显减少（P<0.05或P<0.01）;鹜芪中、高剂量组小鼠血液中Bas明显减少（P<0.05或P<0.01）。见表1。
3.3 鹜芪口服液对Lewis肺癌荷瘤小鼠脾脏、胸腺和胃组织病理学检查
正常对照组小鼠脾脏、胸腺、胃组织学结构清楚，未见明显异常。模型对照组、化疗组小鼠脾脏红髓造血明显，细胞类型多样，红系、粒系、巨核细胞均增生，胸腺萎缩、纤维化，脂肪组织包裹;贞芪扶正组小鼠脾脏白髓淋巴组织尚存，红髓中度造血，细胞类型多样，粒系为主，胸腺萎缩、纤维化，脂肪组织包裹;鹜芪低剂量组小鼠白髓淋巴组织尚存，红髓轻度造血，胸腺萎缩、纤维化，脂肪组织包裹;鹜芪中高剂量组小鼠白髓淋巴组织尚存，红髓轻度造血，胸腺轻度萎缩，局灶性纤维化。各组小鼠胃组织均未见明显异常。见图2-4。
4 讨论
化疗为目前治疗癌症的主要手段之一[10]，化疗药物治疗肿瘤易产生骨髓抑制、白细胞下降、腹泻等副作用，为了降低副反应发生率，临床上建议使用中药辅助治疗[11]，并且大量的临床实践已经证明中医药辅助化疗能减少化疗毒性的发生率，减轻化疗毒性程度，保证化疗的顺利完成[12]。
全身炎症反应与恶性肿瘤的发生与发展密切相关[13]。Balkwill等[14]研究表明，宿主的炎性细胞可促进肿瘤生长、进展并抑制宿主的免疫系统，实验中减少宿主的炎性细胞介质或阻断其作用通路可以抑制肿瘤的进展。中性粒细胞作为一种重要的炎性细胞，其绝对值可以反映肿瘤导致机体的炎癥反应。胸腺和外周免疫器官均有调节作用，脾脏具有非特异性和特异性免疫功能，机体的免疫状态与恶性肿瘤的发生、进展、治疗措施的效果和患者的存活时间均密切相关，在肿瘤的发生、发展过程中，免疫功能往往被抑制，而对免疫器官化疗过程中的保护有助于肿瘤的治疗[15]。
鹜芪口服液主要成份是鸭（去毛，内脏留胃、肠、肝）、丹参、女贞子、黄芪、山楂、大枣、枸杞子、甘草，具有养阴益气和补虚扶正作用[16]。本研究中发现鹜芪口服液联合化疗药物使用能够明显减少Lewis肺癌荷瘤小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos等炎性细胞数目，同时，鹜芪中、高剂量组可明显减少Bas数量，缓解肿瘤发展的分期和进程，能够明显改善Lewis肺癌小鼠脾脏、胸腺的组织病理学变化，可在一定程度上缓解免疫器官的损伤。
综上所述，鹜芪口服液在肿瘤化疗过程中能够发挥中药在减轻化疗副反应方面的优势，因此，鹜芪口服液联合化疗对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有明显的增效减毒作用。
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